分光光度计种类很多，但最常用的是可见光分光光度计，721型分光光度计是一种传统的模拟式分光光度计 。

721型分光光度计

（一）主要用途

721型分光光度计是专供化验室，在可见光谱区范围内（360~800nm）进行定量比色分析用。仪器在410~710nm之间可增加消光片或采用有色溶液作被测溶液的陪衬代空白，以便提高分析灵敏度和提高消光读数范围。

（二）仪器的工作原理

分光光度计的基本原理（图1）是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光吸收的效应，物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，即符合于比色原理朗伯—比耳定律。

图1  分光光度计工作原理

T=I/I₀

logI₀/I=KCL

A=KCL 

T 透射比，I₀入射光强度,I 透射光强度， A 吸光度，K 吸收系数， C 溶液的浓度，L 溶液的光径长度。

从以上公式可以看出，当入射光、吸收系数和溶液的光径长度不变时，透过光是根据溶液的浓度而变化的，721型分光光度计的基本原理是根据上述之物理光学现象而设计的。

721型分光光度计采用自准式光路，单光束方法，其波长范围自360~800nm，用钨丝白炽灯泡作光源。

（三）仪器使用方法

721分光光度计使用步骤如下：

1．在仪器尚未接通电源时，电表的指针必须位于“0”刻线上，若不是这种情况，则可以用电表上的校正螺丝进行调节。

2．将仪器的电源开关接通，打开比色皿暗箱盖，选择需用的单色波长，灵敏度选择请参照第3项操作，调节“0”电位器使电表指“0”，然后将比色皿暗箱盖合上，比色皿座处于蒸溜水校正位置，使光电管受光，旋转调“100%”电位器使电表指针到满度附近，仪器预热约20分钟。

3．放大器灵敏度有五档，应逐步增加，“1”最低，其选择原则是保证使空白档良好调到“100”的情况下，尽可能采用灵敏度较低档，这样仪器将有更高的稳定性。所以使用时一般置“1”，灵敏度不够时再逐渐升高，但改变灵敏度后须按第2项重新校正“0”和“100%”。

4．预热后，按第2项连续几次调整“0”和“100%”，仪器即可以进行测定工作。

5．如果大幅度改变测试波长时，在调整“0”和“100%”后，稍等片刻，（钨灯在急剧改变亮度后需要一段热平衡时间），当指针稳定后重新调整“0”和“100%”即可工作。

（四）仪器使用注意事项

1．该仪器应安放在干燥的房间内，使用时放置在坚固平稳的工作台上，室内照明不宜太强。

2．热天时不能用电扇直接向仪器吹风，防止灯泡灯丝发光不稳。

3．尽量远离高强度的磁场、电场及发生高频波的电器设备。

4．避免在有硫化氢、亚硫酸氟等腐蚀性气体的场所使用。

5．推荐使用交流稳压电源，以加强仪器的抗干扰性能。使用功率为100W以上的电子交流稳压器或交流恒压稳压器。

（五）仪器的主要技术指标

1．波长范围  360~800nm。

2．波长精度  360~600±3nm；606~700±5nm，700~800±8nm。

3．仪器的灵敏度  (1) 重铬酸钾，440nm 不小于0.01A/2.5PPM（含铬量）(2)氯化亚钴，510nm 不小于0.01A/150PPM（含钴量）(3) 硫酸铜，690nm 不小于0.01A/150PPM（含铜量）

4．仪器的重现性误差  不大于0.5%。

5．电源变化范围  190~230V；50周±0.5周。

6．仪器增加消光片后可使吸光读数提高到1~2A左右。